小鼠神经母细胞瘤细胞株用于A型肉毒毒素重链体外实验的可行性研究

《中华细胞与干细胞杂志(电子版)》[ISSN:2095-1221/CN:11-9310/R] 期数: 2015年第5卷第4期 栏目: 论著

作者:王红,高美玲,兰婧等

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页码:241-249

摘要:

【摘要】目的探讨小鼠神经瘤母细胞(Neuro-2a)细胞株用于A型肉毒毒素重链(BoNT/A HC)体外细胞模型的可行性。方法对体外培养1 ~ 5 h的Neuro-2a细胞和经A型肉毒毒素(BoNT/A)重链作用的Neuro-2a细胞(细胞接种于96孔培养板后随机分为对照组、0.01nmol/L组、0.1nmol/L组、1nmol/L组和10nmol/L组),进行BoNT/A HC相关受体的检测,观察BoNT/A HC作用不同时间(24、48及72 h)后BoNT/A HC对细胞突起生长状况的影响,包括有突起细胞的百分比、细胞突起的长度以及突起总数。数据经GraphPad Prism 5.0 One-way ANOVA分析。结果体外培养后Neuro-2a细胞表达高亲和力的突触囊泡蛋白2 (SV2)和低亲和力的三涎酸神经节苷脂亚型1b (GT1b)受体。与对照组相比,BoNT/A HC能明显促进Neuro-2a细胞突起再生及突起长度增加,其中0.1 nmol/L BoNT/A HC作用24h后突起的Neuro-2a细胞百分比为(20.61±4.87)﹪高于对照组[(15.27±3.56)﹪,F=37.7,P<0.001]、神经突起的总数量为(2.18±1.24)个高于对照组(1.68±0.99)个,(F=9.54,P<0.001)、平均突起的长度为(38.76±38.11) μm,与对照组(23.38±27.13)μm相比差异无统计学意义;当BoNT/A HC的浓度增加为1、10nmol/L时,有突起的Neuro-2a细胞百分比分别为(15.08±5.27)﹪和(12.65±5.65)﹪,神经突起的总数量分别为(1.65±0.85)个和(1.64±0.85)个、平均突起的长度分别为(33.75±39.11) μm和(18.95±21.71) μm,与对照组相比差别不大,差异无统计学意义。随作用时间的延长(48h和72h)0.1nmol/L组有突起细胞的百分比、细胞突起的长度以及突起总数与对照组相比均增高,且差异具有统计学意义,而1,10nmol/L组中细胞变化差异无统计学意义。结论Neuro-2a细胞可用于BoNT/A HC体外研究的细胞模型,BoNT/A HC的作用表现为低浓度(0.1nmol/L)的促进作用而高浓度(10nmol/L)时呈现抑制。

【关键词】肉毒毒素类;突触蛋白类;神经节苷脂类