Indoxyl Sulfate诱导腹膜间皮细胞转分化的实验研究

《中华细胞与干细胞杂志(电子版)》[ISSN:2095-1221/CN:11-9310/R] 期数: 2017年第7卷第3期 栏目: 论著

作者:王强,俞国庆,黄雅清,等

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页码:152-158

摘要:

【摘要】 目的 硫酸吲哚酚(IS)刺激永生化人腹膜间皮细胞株(HMrSV5)后,研究细胞是否发生上皮细胞-间充质转分化(EMT),同时探索转化生长因子β1(TGF-β1)可能在其中的作用。方法 体外培养HMrSV5,传代后,随机将人腹膜间皮细胞株分成以3组:对照组:加入4.25﹪腹膜透析液与培养液共培养;IS处理组:分别用含250 µmol/LIS、500 µmol/LIS、1 000 µmol/LIS浓度的培养液与4.25﹪腹膜透析液共培养;TGF-β1受体抑制剂组:用含2 µmol/L LY364947+IS的培养液与4.25﹪腹膜透析液共培养。分别在培养0、4、12、24、48和72 h时间下,采用细胞免疫荧光法观察细胞形态变化,Western Blot法研究细胞α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达规律,48 h时用ELISA法测定纤维连接蛋白(FN),层粘连蛋白(LN5)两种基质蛋白的分泌情况。结果 (1)免疫荧光法显示:与正常细胞比较,IS处理组细胞由典型的铺路样鹅卵石状,逐渐变细变长,呈梭形改变;而TGF-β1受体抑制剂组细胞形态变化不明显,不如IS处理组;(2)Western Blot法检测结果显示:与对照组比较,IS处理组α-SMA的表达水平明显增加,48 h时1 000 µmol/LIS表达最明显(39.929±2.610 vs 0.996±0.001;P < 0.01),差异有统计学意义;与IS处理组比较,TGF-β1受体抑制剂组的表达则明显减少,其中48 h时抑制明显(7.418±3.075 vs 39.929±2.610,P < 0.01),差异有统计学意义;(3)ELISA法结果显示:与对照组比较,IS处理组基质蛋白FN(1.368±0.040 vs 1.094±0.036,P < 0.01)、LN5(1.031±0.085 vs 0.860±0.063,P < 0.01)的表达均上调,差异有统计学意义;与IS处理组比较,TGF-β1受体抑制剂组FN(0.925 ±0.15 vs 1.368 ±0.040,P < 0.01)、LN5(0.795±0.426 vs 1.031±0.085,P < 0.01)分泌均减少,差异有统计学意义。结论 IS可诱导腹膜间皮细胞发生EMT,TGF-β1的参与可能起重要作用,这为治疗腹膜纤维化可能提供新的靶点。
【关键词】 腹膜间皮细胞;   硫酸吲哚酚; 细胞上皮-间充皮转分化; 转化生长因子β 
 
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