新型慢病毒转染四种细胞及在体内示踪的研究

《中华细胞与干细胞杂志(电子版)》[ISSN:2095-1221/CN:11-9310/R] 期数: 2017年第7卷第4期 栏目: 论著

作者:刘菊芬,阮光萍,李自安,等

单位:

关键词:

页码:189-194

摘要:

【摘要】 目的 探讨最佳的生物标记方法示踪细胞,更好地观察细胞移植后在体内的归巢情况。方法 本实验室用一种新型慢病毒(eGFP+PURO Lentivirus)转染了四种细胞,确定了四种细胞的最佳感染复数,细胞转染成功后,用最佳浓度的嘌呤霉素筛选,获得四种稳定的GFP阳性表达细胞株。所用的细胞包括人脐带间充质干细胞(hUC-MSC),树鼩脐带间充质干细胞(TS-UC-MSC),人胚肾细胞(293T),C57BL小鼠骨髓间充质干细胞(C57-BMSC)。结果 用新型慢病毒(eGFP+PURO Lentivirus)成功转染四种常用细胞,转染成功率100﹪,细胞成功标记上GFP荧光,并确定了最佳的嘌呤霉素使用浓度,确定了不同细胞的感染复数。最终确定TS-UC-MSC的最佳感染复数为240,hUC-MSC的最佳感染复数为150,293T的最佳感染复数为100,C57-BMSC的最佳感染复数为50。用带荧光的C57-BMSC细胞回输C57BL小鼠体内,冰冻切片在肝中找到标记细胞,在脾、肺、肾、心未找到标记细胞,说明外来细胞主要在肝脏中代谢。结论 在细胞移植治疗时,细胞成功标记上GFP能在动物体内进行示踪,良好的细胞示踪方法可以很好地反映所研究细胞在体内外的动向。
【关键词】 绿色荧光蛋白质类; 慢病毒属; 转染; 骨髓; 间质干细胞; 荧光抗体技术
【摘要】 目的 探讨最佳的生物标记方法示踪细胞,更好地观察细胞移植后在体内的归巢情况。方法 本实验室用一种新型慢病毒(eGFP+PURO Lentivirus)转染了四种细胞,确定了四种细胞的最佳感染复数,细胞转染成功后,用最佳浓度的嘌呤霉素筛选,获得四种稳定的GFP阳性表达细胞株。所用的细胞包括人脐带间充质干细胞(hUC-MSC),树鼩脐带间充质干细胞(TS-UC-MSC),人胚肾细胞(293T),C57BL小鼠骨髓间充质干细胞(C57-BMSC)。结果 用新型慢病毒(eGFP+PURO Lentivirus)成功转染四种常用细胞,转染成功率100﹪,细胞成功标记上GFP荧光,并确定了最佳的嘌呤霉素使用浓度,确定了不同细胞的感染复数。最终确定TS-UC-MSC的最佳感染复数为240,hUC-MSC的最佳感染复数为150,293T的最佳感染复数为100,C57-BMSC的最佳感染复数为50。用带荧光的C57-BMSC细胞回输C57BL小鼠体内,冰冻切片在肝中找到标记细胞,在脾、肺、肾、心未找到标记细胞,说明外来细胞主要在肝脏中代谢。结论 在细胞移植治疗时,细胞成功标记上GFP能在动物体内进行示踪,良好的细胞示踪方法可以很好地反映所研究细胞在体内外的动向。
【关键词】 绿色荧光蛋白质类; 慢病毒属; 转染; 骨髓; 间质干细胞; 荧光抗体技术
 
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