大鼠骨骼肌卫星细胞诱导分化为胰岛素生成细胞的研究

《中华细胞与干细胞杂志(电子版)》[ISSN:2095-1221/CN:11-9310/R] 期数: 2018年第8卷第3期 栏目: 论著

作者:任宇,梁红宇,楠吉桑漠,等

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页码:161-167

摘要:

  【摘要】 目的 探讨大鼠骨骼肌卫星细胞(MDSCs)定向诱导分化为胰岛素生成细胞(IPCs),为1型糖尿病的干细胞治疗提供一种新的研究思路。方法 通过二次酶消化法和差速贴壁培养法分离、培养大鼠MDSCs,利用不同的诱导培养液使MDSCs定向分化为IPCs,并对诱导后细胞进行形态观察,通过双硫腙染色和免疫组化染色对MDSCs-IPCs形态进行鉴定,采用Q-PCR和Western Blot方法检测MDSCs-IPCs中C-peptide和Insulin的表达,通过胰岛素释放实验检测MDSCs-IPCs的生物学功能,β细胞和MDSCs-IPCs两组间比较采用t检验。结果 MDSCs 在接种4 h后开始贴壁部分细胞伸出小的突起,48 h后绝大多数细胞贴壁呈梭形、胞浆丰富、折光度高。随着培养时间的延长,细胞的梭形形状更为明显且生长迅速。免疫组化结果显示细胞表达Desmin、α-Sarcomeric Actinin、MyoD1、Myf5和PAX7。成胰诱导后MDSCs形成胰岛样的圆形细胞团,双硫腙染色呈猩红色,Insulin免疫组化染色阳性。Q-PCR结果显示MDSCs-IPCs中C-peptide和Insulin mRNA表达量分别是β细胞的0.73倍(P > 0.05)和0.79倍(P > 0.05)。胰岛素释放实验显示,5.6 mmol/L和16.7 nmlol/L葡萄糖刺激培养2 h后,β细胞和MDSCs-IPCs分泌胰岛素量分别为[(20.3±4.2)mU/L]、[(16.1±3.7)mU/L]、[(60.5±9.3)mU/L]和[(40.9±7.3)mU/L],葡萄糖可调节 MDSCs-IPCs 胰岛素的分泌。结论 MDSCs易于分离培养、增殖能力强,体外可诱导分化为有功能的IPCs,适合作为再生医学的种子细胞。
  【关键词】 骨骼肌卫星细胞; 胰岛素生成细胞; 诱导分化; 功能
 
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