人脐带间充质干细胞微囊减轻小鼠急性肾损伤的研究

《中华细胞与干细胞杂志(电子版)》[ISSN:2095-1221/CN:11-9310/R] 期数: 2018年第8卷第5期 栏目: 论著

作者:张志远,侯艳萍,邹翔宇等

单位:

关键词:

页码:264

摘要:

人脐带间充质干细胞微囊减轻小鼠急性肾损伤的研究
张志远1 侯艳萍1 邹翔宇1 周瑾1 邢晓宇1 琚官群2 钟量1 孙杰1
【摘要】 目的 探讨人脐带间充质干细胞(MSCs)源性细胞外囊泡Oct-4 mRNA对受损的肾小管上皮细胞修复的作用及相关机制。方法 将培养的缺氧损伤肾小管上皮细胞置于含有人脐带MSCs细胞外囊泡及不同对照培养液的培养腔室玻片上孵育48 h,应用BrdU及TUNEL染色,检测各组细胞增殖或凋亡情况。将急性肾损伤模型小鼠分为4组:空白组、EVs组、Oct-4过表达组、Oct-4低敲组。并按照分组分别注射磷酸盐缓冲液(Vehicle),人脐带MSCs细胞外囊泡(EVs),过表达Oct-4基因的人脐带MSCs细胞外囊泡(EVs + Oct-4)及敲除Oct-4基因的人脐带MSCs外囊泡(EVs-Oct-4),并在注射48 h及2周后采血测肌酐(Crea)及尿素氮(BUN),了解肾功能变化;对各组上述处理后的肾组织应用TUNEL与增殖细胞核抗原表达量检测各组肾脏细胞凋亡与增殖情况;通过Masson染色检测了各组肾脏纤维化程度;通过PCR探索肾损伤后肾组织细胞Snail基因的表达变化。数据分析采用方差分析和SNK-q 检验。结果 EVs + Oct-4处理缺氧的肾小管上皮细胞48 h后,TUNEL染色显示具有最少的凋亡细胞数(0~1)/ HPF,BrdU显示有最多的增殖细胞(7±2)/HPF。EVs,EV-Oct-4以及Vehicle对体外缺氧肾小管上皮细胞的上述作用依次减弱(P < 0.01)。急性肾损伤后,注射EVs + Oct-4可降低肾损伤后Crea水平(28 mmol/L)和BUN水平(17 mmol/L);并抑制肾组织纤维化,使Masson染色阳性面积减少至(3.2±1.0)﹪;同时提高肾组织PCNA染色阳性细胞数(损伤48h后为(70±7)/HPF,2周后为(21±4)/HPF,减少TUNEL染色阳性细胞数[损伤48 h后为(2±1)/HPF,2周后为(3±2)/ HPF]。注射EVs,EV-Oct-4以及Vehicle对产生上述效应的作用依次减弱(P < 0.01)。PCR结果表明,Vehicle组肾小管上皮细胞Snail表达最高2.3±0.2,而EVs + Oct-4则可降低Snail表达0.7±0.1。结论 EVs可通过抑制凋亡促进增殖、抑制纤维化治疗肾损伤,而这其中EVs包含的OCT-4 mRNA可通过抑制肾损伤后Snail基因的表达来抑制肾脏纤维化的形成。
【关键词】 急性肾损伤; 间充质干细胞; 细胞外囊泡
【摘要】 目的 探讨人脐带间充质干细胞(MSCs)源性细胞外囊泡Oct-4 mRNA对受损的肾小管上皮细胞修复的作用及相关机制。方法 将培养的缺氧损伤肾小管上皮细胞置于含有人脐带MSCs细胞外囊泡及不同对照培养液的培养腔室玻片上孵育48 h,应用BrdU及TUNEL染色,检测各组细胞增殖或凋亡情况。将急性肾损伤模型小鼠分为4组:空白组、EVs组、Oct-4过表达组、Oct-4低敲组。并按照分组分别注射磷酸盐缓冲液(Vehicle),人脐带MSCs细胞外囊泡(EVs),过表达Oct-4基因的人脐带MSCs细胞外囊泡(EVs + Oct-4)及敲除Oct-4基因的人脐带MSCs外囊泡(EVs-Oct-4),并在注射48 h及2周后采血测肌酐(Crea)及尿素氮(BUN),了解肾功能变化;对各组上述处理后的肾组织应用TUNEL与增殖细胞核抗原表达量检测各组肾脏细胞凋亡与增殖情况;通过Masson染色检测了各组肾脏纤维化程度;通过PCR探索肾损伤后肾组织细胞Snail基因的表达变化。数据分析采用方差分析和SNK-q 检验。结果 EVs + Oct-4处理缺氧的肾小管上皮细胞48 h后,TUNEL染色显示具有最少的凋亡细胞数(0~1)/ HPF,BrdU显示有最多的增殖细胞(7±2)/HPF。EVs,EV-Oct-4以及Vehicle对体外缺氧肾小管上皮细胞的上述作用依次减弱(P < 0.01)。急性肾损伤后,注射EVs + Oct-4可降低肾损伤后Crea水平(28 mmol/L)和BUN水平(17 mmol/L);并抑制肾组织纤维化,使Masson染色阳性面积减少至(3.2±1.0)﹪;同时提高肾组织PCNA染色阳性细胞数(损伤48h后为(70±7)/HPF,2周后为(21±4)/HPF,减少TUNEL染色阳性细胞数[损伤48 h后为(2±1)/HPF,2周后为(3±2)/ HPF]。注射EVs,EV-Oct-4以及Vehicle对产生上述效应的作用依次减弱(P < 0.01)。PCR结果表明,Vehicle组肾小管上皮细胞Snail表达最高2.3±0.2,而EVs + Oct-4则可降低Snail表达0.7±0.1。结论 EVs可通过抑制凋亡促进增殖、抑制纤维化治疗肾损伤,而这其中EVs包含的OCT-4 mRNA可通过抑制肾损伤后Snail基因的表达来抑制肾脏纤维化的形成。
【关键词】 急性肾损伤; 间充质干细胞; 细胞外囊泡
【摘要】 目的 探讨人脐带间充质干细胞(MSCs)源性细胞外囊泡Oct-4 mRNA对受损的肾小管上皮细胞修复的作用及相关机制。方法 将培养的缺氧损伤肾小管上皮细胞置于含有人脐带MSCs细胞外囊泡及不同对照培养液的培养腔室玻片上孵育48 h,应用BrdU及TUNEL染色,检测各组细胞增殖或凋亡情况。将急性肾损伤模型小鼠分为4组:空白组、EVs组、Oct-4过表达组、Oct-4低敲组。并按照分组分别注射磷酸盐缓冲液(Vehicle),人脐带MSCs细胞外囊泡(EVs),过表达Oct-4基因的人脐带MSCs细胞外囊泡(EVs + Oct-4)及敲除Oct-4基因的人脐带MSCs外囊泡(EVs-Oct-4),并在注射48 h及2周后采血测肌酐(Crea)及尿素氮(BUN),了解肾功能变化;对各组上述处理后的肾组织应用TUNEL与增殖细胞核抗原表达量检测各组肾脏细胞凋亡与增殖情况;通过Masson染色检测了各组肾脏纤维化程度;通过PCR探索肾损伤后肾组织细胞Snail基因的表达变化。数据分析采用方差分析和SNK-q 检验。结果 EVs + Oct-4处理缺氧的肾小管上皮细胞48 h后,TUNEL染色显示具有最少的凋亡细胞数(0~1)/ HPF,BrdU显示有最多的增殖细胞(7±2)/HPF。EVs,EV-Oct-4以及Vehicle对体外缺氧肾小管上皮细胞的上述作用依次减弱(P < 0.01)。急性肾损伤后,注射EVs + Oct-4可降低肾损伤后Crea水平(28 mmol/L)和BUN水平(17 mmol/L);并抑制肾组织纤维化,使Masson染色阳性面积减少至(3.2±1.0)﹪;同时提高肾组织PCNA染色阳性细胞数(损伤48h后为(70±7)/HPF,2周后为(21±4)/HPF,减少TUNEL染色阳性细胞数[损伤48 h后为(2±1)/HPF,2周后为(3±2)/ HPF]。注射EVs,EV-Oct-4以及Vehicle对产生上述效应的作用依次减弱(P < 0.01)。PCR结果表明,Vehicle组肾小管上皮细胞Snail表达最高2.3±0.2,而EVs + Oct-4则可降低Snail表达0.7±0.1。结论 EVs可通过抑制凋亡促进增殖、抑制纤维化治疗肾损伤,而这其中EVs包含的OCT-4 mRNA可通过抑制肾损伤后Snail基因的表达来抑制肾脏纤维化的形成。
【关键词】 急性肾损伤; 间充质干细胞; 细胞外囊泡
 
 
 下载信息  [文件大小:9.94 MB 下载次数: 次]
点击下载文件:人脐带间充质干细胞微囊减轻小鼠急性肾损伤的研究