循环内皮微粒相关microRNA在巨噬细胞炎性反应诱发动脉粥样硬化发生中的作用机制

《中华细胞与干细胞杂志(电子版)》[ISSN:2095-1221/CN:11-9310/R] 期数: 2018年第8卷第6期 栏目: 论著

作者:陈泓颖,张宇航,高光敏,等

单位:

关键词:

页码:348

摘要:

  【摘要】 目的 研究循环内皮微粒相关microRNA在巨噬细胞炎性反应诱发动脉粥样硬化(AS)发生的作用机制。方法 选取实验组和对照组SPF级5周小鼠各50只。实验小鼠分4组:对照组、动脉粥样硬化模型组(AS模型组)、NC-miRNA 组和miRNA-19b抑制剂组,采用油红染色对AS病变的组织学进行观察,计算斑块面积相对比例,并检测生化指标的表达水平,主要包括血清中高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和甘油三酯(TG),ELISA检测血管炎症因子TNF-α、IL-1、IL-6和IL-10的变化,Western Blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、cleaved-caspase-3和Bax表达的变化,实时荧光定量PCR检测miR-19b表达,流式细胞法检测巨噬细胞的凋亡率。多组间比较采用单因素方差分析或者重复测量的方差分析,两两比较采用LSD-t检验。结果 各组胸腔动脉斑块面积百分比:对照组为(0.00±0.00)﹪;AS模型组为(9.59±6.53)﹪;NC-miRNA 组为(8.96±3.47)﹪;miRNA-19b抑制剂组为(3.21±2.03)﹪,三组间比较差异有统计学意义(F = 20.572,P = 0.002)。与对照组比较,AS模型组和NC-miRNA组TC[AS模型组(3.26±0.21)mmol/L;NC-miRNA 组(3.13± 0.14) mmol/ L;F = 13.994,P = 0.002]、TG[AS模型组(0.25±0.06) mmol/L;NC- miRNA(0.21±0.02) mmol/L;F = 11.230,P = 0.011)]和LDL-C [AS模型组 (1.65±0.11) mmol/ L;NC-miRNA (1.59± 0.27) mmol/L;F = 10.069,P = 0.006)]水平升高,而HDL-CAS模型组 [(0.08±0.09) mmol/L;NC-miRNA (0.08±0.05) mmol/L;F = 12.450,P = 0.004)]水平含量降低。与模型组比较,miRNA-19b抑制剂组TC(1.85±0.06) mmol/L、TG(0.15±0.03) mmol/ L和LDL-C(1.21±0.10) mmol/L水平降低,HDL-C (0.11±0.05) mmol/L水平则升高(P均< 0.05)。AS模型组与对照组相比,IL-1(34.06±3.58)g/L、IL-6(92.57±31.97)g/L和TNF-α(63.01±15.65) g/L水平升高,而 IL-10(16.86±1.29)g/L的水平降低,NC-miRNA 组各指标亦有相同的变化趋势;miRNA-19b抑制剂组IL-1(24.85±6.21) g/L、IL-6(53.29±17.15) g/ L和TNF-α(34.51±6.47 )g/L水平低于AS模型组和NC-miRNA 组(F = 13.671,P = 0.002),IL-10(24.94±4.72) g/L的水平则高于两组(F = 13.675,P = 0.008)。和对照组相比,AS模型组和NC- miRNA组的Bax(AS模型组3.39±0.01;NC-miRNA组0.64±0.02;F = 26.910,P = 0.000)和cleaved-PARP (AS模型组2.47±0.05;NC- miRNA组3.27±0.01;F = 13.226,P = 0.000)表达量升高。但Bcl-2(AS模型组0.67±0.02;NC-miRNA组0.64±0.02;F = 12.585,P = 0.000)表达水平下调。与NC- miRNA 组相比,miRNA-19b抑制剂组的促细胞凋亡的蛋白Bax(2.16±0.02)和cleaved-PARP(1.91±0.04)表达水平下调,Bcl-2(1.05±0.01)的表达水平上调。与对照组比较,AS模型组(2.71±0.02)和NC-miRNA 组(2.43±0.02)的miRNA- 19b的转录水平增加,差异有统计学意义(P均< 0.05),miRNA-19b抑制剂组(1.52±0.01)转录水平有升高,但相较于AS模型组和NC-miRNA 组的变化其增加量不显著,(F = 15.353,P = 0.002)。miRNA-19b基因转录水平:对照组为1.02±0.03;AS模型组为2.71±0.02;NC- miRNA 组为2.43±0.02;miRNA- 19b抑制剂组为1.52±0.01(P均 < 0.05)。细胞凋亡率:对照组为(4.41±0.18)﹪;AS模型组为(7.16±0.73)﹪;NC-miRNA 组为(6.29±0.24)﹪;miRNA-19b抑制剂组为(5.01±0.11)﹪,(F = 12.889,P = 0.008)。结论 miRNA-19b抑制剂可以减少巨噬细胞的凋亡,降低促炎症因子,可减少由于AS引起的血管厚度的增加,减少AS斑块的面积比例,使血脂中的 TC、TG 和 LDL-C水平降低,HDL-C水平则有升高,这对冠心病的临床诊疗具有重要的临床指导意义。
  【关键词】 内皮微粒; miRNA-19b; 巨噬细胞; 炎症因子; 动脉粥样硬化