TSP1对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响研究

《中华细胞与干细胞杂志(电子版)》[ISSN:2095-1221/CN:11-9310/R] 期数: 2019年第9卷第2期 栏目: 论著

作者:周才芳,曾秀琴,曾庆义

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页码:65

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【摘要】 目的 探讨血小板反应蛋白1(TSP1)对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及炎症因子分泌的影响。方法 以肾小管上皮细胞为研究对象,通过转染TSP-1 shRNA(shTSP-1),沉默TSP-1基因,探讨下调TSP1对高糖条件下肾小管上皮细胞损伤的影响。肾小管上皮细胞依次分为:对照组(以5.6 mmol/L葡萄糖培养)、高糖组(以30 mmol/L葡萄糖培养)、NC+高糖组(对照慢病毒转染,以30 mmol/L葡萄糖培养)、干扰+高糖组(TSP1 shRNA慢病毒转染以30 mmol/L葡萄糖培养)。 Realtime PCR和Western Blot检测高糖对细胞中TSP1表达影响,同时检测TSP1 shRNA干扰效果。DCFH-DA法检测细胞中活性氧(ROS)水平,硫代巴比妥酸法检测培养液中丙二醛(MDA)含量,ELISA法检测培养液上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)含量,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western Blot法检测细胞中活化的Caspase-3(c-caspase-3)蛋白水平。两组均数差异比较采用独立样本t检验,多组均数间差异比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验。结果 高糖组细胞中TSP1 mRNA和蛋白水平高于对照组(P < 0.05)。干扰+高糖组细胞中TSP1 mRNA和蛋白水平低于高糖组(P < 0.05)。与对照组比较,高糖组细胞中ROS水平升高,培养液中MDA、TNF-α、IL-8含量升高[(2.36±0.21)nmol/ml、(45.91±2.87)ng/ml、(25.42±3.26) ng/ ml :(1.05± 0.13)nmol/ ml、(20.14±1.36)ng/ml、(12.98±1.63)ng/ml],差异有统计学意义(F = 18.595,F = 43.825,F = 21.155,P < 0.05);细胞凋亡率升高(P < 0.05),细胞中c-caspase-3蛋白水平升高(P < 0.05)。与高糖组和NC+高糖组比较,干扰+高糖组细胞中ROS水平降低,培养液中MDA、TNF-α、IL-8含量降低[(1.63±0.10)nmol/ml、(34.20±2.06)ng/ml、(18.75±1.62)ng/ ml :(2.36 ± 0.21) nmol/ ml、(45.91±2.87)ng/ml、(25.42±3.26)ng/ml和(2.30±0.42)nmol/ ml、(46.32±5.24) ng/ml、(26.91±2.74)ng/ml],差异具有统计学意义(F = 18.595,F = 43.825,F = 21.155,P < 0.05);细胞凋亡率降低,细胞中c-caspase-3蛋白水平降低(P < 0.05)。结论 高糖诱导肾小管上皮细胞中TSP1表达,下调其表达可以减少细胞分泌炎症因子,抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤。
【关键词】 TSP1; 肾小管上皮细胞; 高糖; 炎症因子; 损伤
 

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