青光安颗粒剂对TGF-β1诱导的HTFs增殖影响的实验研究

《中华细胞与干细胞杂志(电子版)》[ISSN:2095-1221/CN:11-9310/R] 期数: 2019年第9卷第2期 栏目: 论著

作者:喻娟 彭清华

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页码:79

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【摘要】 目的 探讨青光安颗粒剂抑制转化生长因子β1 (TGF-β1)诱导的人类Tenon成纤维细胞(HTFs)增殖的可能机制。方法 从接受青光眼滤过手术(GFS)的个体获得人结膜下Tenon胶囊样品。实验设计分为3组:对照组(HTFs未经处理,n = 10);TGF-β1诱导组(100 ng/ ml TGF-β1诱导HTFs,构建GFS术后细胞模型,n = 10);TGF-β1+青光安治疗组(TGF-β1诱导+青光安颗粒剂血清处理HTFs,n = 30)。TGF-β1+青光安治疗组按照青光安血清的剂量进一 步分为3组:TGF-β1+青光安高剂量组(TGF-β1诱导+青光安颗粒剂血清5 ml处理HTFs);TGF-β1+青光安中剂量组(TGF-β1诱导+青光安颗粒剂血清2.5 ml处理HTFs);TGF-β1+青光安低剂量组(TGF-β1诱导+青光安颗粒剂血清处理1 ml HTFs);每组设10个培养皿。通过CCK-8检测青光安对TGF-β1诱导HTFs增殖的影响;通过流式细胞术评估青光安对细胞周期的影响;通过Cyto-ID免疫细胞化学染色测定青光安颗粒剂对HTFs细胞自噬的影响;采用RT-PCR和Western Blot法测定自噬体形成的必需蛋白质Beclin-1,ATG-5和LC3-Ⅲ基因和蛋白的表达水平。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结 果 青光安能够抑制TGF-β1诱导HTFs的增殖能力,TGF-β1+青光安高剂量组细胞增殖水平(13.52±1.24)较TGF-β1诱导组(23.42±1.25)降低,差异有统计学意义(F = 12.347,P < 0.01);TGF-β1诱导G0/ G1期的比例(88.29±0.35)降低,而S期的比例(9.04±0.25)升高,而青光安治疗能够导致G0/ G1期的比例(91.18±1.04)增加,而S期的比例(5.41±0.59)降低,差异有统计学意义(F = 13.857,P < 0.01);与TGF-β1诱导组相比,用TGF-β1+青光安治疗组导致荧光染色强度(1.84±0.14)降低,HTFs阳性细胞数目(112.46±12.11)减少,差异有统计学意义(F = 12.347,P = 18.472);TGF-β1+青光安治疗组能抑制TGF-β1诱导对自噬基因Beclin-1、ATG-5和LC- 3Ⅲ mRNA和蛋白质表达增加(P < 0.05)。结论 青光安颗粒剂抑制TGF-β1诱导的HTFs增殖,且可能机制为青光安诱导HTFs细胞周期停滞于G0/G1期,而且青光安可减少TGF-β1诱导的HTFs自噬。
【关键词】 青光眼; 青光安颗粒剂; Tenon's囊成纤维细胞; 自噬; 滤过性手术
 

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