下调TLR4对LPS诱导的支气管上皮16HBE细胞损伤的影响及其机制

《中华细胞与干细胞杂志(电子版)》[ISSN:2095-1221/CN:11-9310/R] 期数: 2019年第9卷第3期 栏目: 论著

作者:申光富 罗长琴 黄波等

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页码:166

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【摘要】 目的 探讨TLR4对脂多糖(LPS)诱导的支气管上皮16HBE细胞损伤的影响及其机制。方法 将3条siRNA-TLR4-1、siRNA-TLR4-2和siRNA-TLR4-3转染至16HBE细胞中,筛选出最佳的siRNA-TLR4干扰序列进行实验。实验分为对照组(未处理)、LPS组(给予50 μg/ml LPS处理)、LPS+siNC组(转染siRNA-NC后给予50 μg/ml LPS处理)和LPS+siTLR4组(分别转染设计的3条siRNA-TLR4后给予50 μg/ml LPS处理),采用RT-PCR检测TLR4、IL-6和TNF-α mRNA的表达,MTT法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western Blot检测Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、NF-κB p65和IκBα蛋白的表达。多组间比较使用单因素方差分析,组间多重比较采用SNK-q,两组间比较采用独立样本t检验。结果 LPS组与LPS+siTLR4-2组 TLR4 mRNA(2.05±0.12,3.28±0.15)和蛋白表达(0.38±0.03,0.77±0.05)比较,差异具有统计学意义(t = 11.091,11.585,P均< 0.001);LPS组与LPS+siTLR4-3组 TLR4 mRNA(1.39±0.09,3.28±0.15)和蛋白表达(0.31±0.02,0.77±0.05)比较,差异具有统计学意义(t = 20.857,12.650,P均 < 0.001)且siRNA-TLR4-3的效果最为显著。与对照组相比,LPS组、LPS+siNC组和LPS+siTLR4组细胞中IL-6 mRNA(11.42±1.05,11.38±1.34,6.22±0.35,0.97±0.06,F = 98.803,P均< 0.01)、TNF-α mRNA(15.76±1.12,15.69±0.87,7.54±0.41,1.03±0.09,F = 278.064,P均< 0.01)、Cleaved Caspase-3蛋白(0.75±0.06,0.77±0.05,0.38±0.03,0.13±0.02,F = 154.851,P均< 0.01)、Bax蛋白(0.48±0.05,0.52±0.05,0.33±0.02,0.11±0.02,F = 71.310,P均< 0.01)、NF-κBp65蛋白(0.64±0.05,0.67±0.05,0.45±0.04,0.28±0.02,F = 56.571,P 均 < 0.01)的表达水平和细胞凋亡率[(21.36±2.85)﹪,(20.94±3.22)﹪,(13.08±1.16) ﹪,(7.25±1.28)﹪,F = 25.685,P均< 0.01]均明显升高,而细胞活力(0.53±0.04,0.51±0.04,0.78±0.06,1.15±0.08,F = 80.811,P均< 0.01)和Bcl-2蛋白(0.28±0.03,0.25±0.03,0.40±0.03,0.69±0.06,F = 76.762,P均< 0.01)、IκBα蛋白(0.38±0.03,0.35±0.03,0.44±0.03,0.72±0.06,F = 53.635,P均< 0.01)的表达水平均明显降低;与LPS组相比,LPS+siTLR4组中IL-6 mRNA、TNF-α mRNA、Cleaved Caspase-3蛋白、Bax蛋白、NF-κBp65蛋白的表达水平和细胞凋亡率均明显降低,差异有统计学意义(t = 8.138,11.937,9.553,4.825,5.140,4.661,P均< 0.01),而细胞活力和Bcl-2蛋白、IκBα蛋白的表达水平均明显升高,差异有统计学意义(t = 6.005,4.899,3.674,P < 0.05),而LPS组和LPS+siNC组间差异无统计学意义(P > 0.05)。结论 下调TLR4可通过抑制NF-κB通路激活抑制LPS诱导的细胞凋亡和炎症反应减轻16HBE细胞损伤。
【关键词】 Toll样受体4; 脂多糖; 支气管上皮细胞; 炎症; 凋亡