miR-142-3p靶向FSTL1基因对结直肠癌细胞增殖、凋亡以及放疗敏感性的影响

《中华细胞与干细胞杂志(电子版)》[ISSN:2095-1221/CN:11-9310/R] 期数: 2019年第9卷第4期 栏目: 论著

作者:董明强,汪蕊,王志华,等

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页码:216

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【摘要】 目的 探究miR-142-3p靶向卵泡抑素样蛋白1(FSTL1)对结直肠癌(CRC)细胞增殖、凋亡以及放疗敏感性的影响。方法 培养正常人结肠细胞FHC与CRC细胞系SW480、DLD-1、HCT116和Caco-2,qRT-PCR检测细胞中miR-142-3P水平,Western Blot检测FSTL1蛋白水平;分别转染miR-142-3p模拟物(miR-142-3p组)、模拟物阴性对照(miR-NC组)、FSTL1的si-RNA9(si-FSTL1组)、si-RNA阴性对照(si-con组)至CRCSW480细胞,MTT检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,Western Blot检测增殖、凋亡相关蛋白水平,克隆形成实验检测放射敏感性;双荧光素酶报告基因、Western Blot验证miR-142-3p与FSTL1关系及在CRC中作用。采用t检验和方差分析进行统计学分析。结果 CRC细胞SW480、DLD- 1、HCT116、Caco-2中miR-142-3p水平(0.86±0.09、1.09±0.11、0.76±0.08、0.98±0.10)低于正常结肠细胞FHC (2.56±0.26),差异具有统计学意义(t = 18.536,15.621,19.851,17.016,P均< 0.01),FSTL1 mRNA水平2.26±0.23、1.39±0.14、2.01±0.20、1.98±0.19高于FHC细胞(0.79±0.08),差异具有统计学意义(t = 18.110,11.163,16.991,17.317,P均 < 0.01),FSTL1 蛋白水平(1.16±0.12、1.09±0.11、0.96±0.09、0.95±0.10)高于FHC细胞(0.37±0.04),差异有统计学意义(t = 18.736,18.454,17.972,16.155,P均 < 0.01);miR- 142- 3p组CRC细胞SW480凋亡率(30.23±3.10)和Bax水平(1.02±0.11)高于miR- con 组8.96±0.89,0.45±0.05,t = 19.785,14.152,P均< 0.01,72 h细胞增殖活力(1.16±0.11)、CyclinD1 (0.35±0.05)、Bcl-2 (0.38±0.04)、8 Gy (7.56±0.75)细胞存活率低于miR-con组(1.60±0.16,1.02±0.12,0.98±0.10,10.35±1.25,t = 6.798,15.462,16.713,5.742,P均< 0.01);si-FSTL1组SW480细胞72 h的细胞增殖活力(1.05±0.11)、CyclinD1(0.40±0.05)、Bcl-2(0.42±0.05)低于si- con组(1.60±0.16,1.05±0.10,1.00±0.12,t = 8.498,17.441,13.385,P均< 0.01),Bax(1.00±0.11)高于si-con组(0.41±0.04,t = 15.122,P < 0.01);miR- 142-3p负调控FSTL1表达,过表达FSTL1逆转了miR-142-3p过表达SW480细胞增殖、凋亡及放射敏感性的影响。结论 过表达miR-142-3p可能通过下调FSTL1表达抑制CRC细胞增殖,诱导其凋亡,并增强其放疗敏感性。
【关键词】 miR-142-3p; 卵泡抑素样蛋白1; 结直肠癌; 增殖; 凋亡; 放疗敏感性