沉默Gpr48基因表达对皮肤鳞状细胞癌细胞系A431 PKC信号通路活化及细胞侵袭的影响

《中华细胞与干细胞杂志(电子版)》[ISSN:2095-1221/CN:11-9310/R] 期数: 2019年第9卷第4期 栏目: 论著

作者:张瑞华,杨海平,刘彬

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页码:230

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【摘要】 目的 分析沉默G蛋白偶联受体48 (Gpr48)基因表达对皮肤鳞状细胞癌 (SCC)蛋白激酶C (PKC)信号通路及细胞侵袭能力的影响。方法 构建ShRNA感染皮肤SCC细胞株A431,设计干扰Gpr48表达shRNA(shRNA-Gpr48组)及阴性对照shRNA-NC组,采用实时定量反转录聚合酶联反应 (RT-PCR)检测Gpr48相对表达量;以蛋白印迹法 (Western Blot)测定PKC相关抗体蛋白表达情况,进行Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,总结Gpr48缺失对三丙胺 (TPA)刺激A431细胞株PKC活化及细胞侵袭能力的影响,为SCC靶向治疗提供参照。组间比较采用独立样本t检验。结果 qRT-PCR结果:shRNA-Gpr48组Gpr48相对表达量(0.27±0.06)低于shRNA-NC组(1.01±0.12),差异具有统计学意义(t = 17.441,P < 0.01),shRNA-Gpr48组p-PKCδ (0.463±0.035)低于shRNA-NC组 (0.721±0.074),shRNA- Gpr48组NF-κB p65 mRNA (0.631±0.079)低于shRNA-NC组 (0.834±0.102),差异具有统计学意义(t = 9.966、4.975,P均< 0.01),Notch1 mRNA(0.981±0.037)高于shRNA-NC组(0.562±0.041),差异具有统计学意义(t = 23.991,P < 0.01);Western Blot结果:shRNA-Gpr48组p-PKCδ(0.221±0.034)低于shRNA-NC组 (0.292±0.046)、NF-κB p65蛋白表达 (0.512±0.047)低于shRNA-NC组 (0.636±0.051),差异具有统计学意义(t = 3.925,5.653,P均< 0.01),Notch1(0.524±0.063)高于shRNA-NC组(0.421±0.076),差异具有统计学意义(t = 3.299,P < 0.01);shRNA-Gpr48组侵袭细胞率为(35.03±1.54)﹪,低于shRNA-NC组的(51.83±2.76)﹪,差异具有统计学意义(t = 16.809,P < 0.01)。结论 沉默Gpr 48缺失表达可能通过抑制PKC活化,降低p-PKCδ、NF-κB p65表达,上调抑癌基因Notch1表达,抑制癌细胞增殖、侵袭。
【关键词】 皮肤; 鳞状细胞癌; G蛋白偶联受体48; 信号通路