自剪切多肽P2A对自然杀伤细胞的高效诱导扩增作用的研究

《中华细胞与干细胞杂志(电子版)》[ISSN:2095-1221/CN:11-9310/R] 期数: 2019年第9卷第5期 栏目: 论著

作者:陈雪梅 张曦 林建炜 等

单位:

关键词:

页码:282-291

摘要:

【摘要】 目的 改进现有过继性人自然杀伤(NK)细胞体外诱导、分化及扩增方法,实现高效定向分化及大量扩增NK细胞的目的。方法 利用自剪切多肽P2A连接IL-15和4-1BBL基因,通过慢病毒感染和药物筛选的方法制备稳定表达IL-15和4-1BBL的K562滋养层细胞株。该方法可刺激人PBMC细胞向NK细胞分化及高效增殖。实验结果以x ± s表示并用两样本t检验进行比较。结果 经该方法培养的CD3- CD16+ 56+ NK细胞增殖倍数达到 (4480.43±37.80)倍;CD3- CD16+ 56+ NK细胞纯度达到94.79﹪;细胞内表达IFN-γ和TNF-α的NK细胞比例为 (63.07±3.37)﹪和 (54.85±2.04)﹪,分别高于对照组 (16.28±2.86)﹪和 (14.53±1.15)﹪(t = 62.25,22.66,P 均< 0.01);细胞分泌至培养上清液中的IFN-γ和TNF-α浓度为(111.39±6.95) pg/ ml和 (32.76±3.23) pg/ml,分别高于对照组 (44.99±4.74)pg/ml和 (11.09±2.45) pg/ml(t = 20.56,7.21,P 均< 0.01);在体外,该方法培养的NK细胞对K562细胞的杀伤效率为 (78.52±7.36)﹪,高于对照组 (48.53±6.66)﹪(t = 11.56,P < 0.01);对H520细胞的杀伤效率为 (65.03±3.27)﹪,高于对照组 (35.85±3.99)﹪(t = 11.35,P < 0.01)。结论 利用自剪切多肽P2A构建稳定高表达的IL-15和4-1BBL的K562滋养层细胞株,从而提高了NK细胞增殖倍数、纯度和细胞毒性。
【关键词】 自剪切多肽P2A; 自然杀伤细胞; 滋养层细胞; 细胞免疫治疗
  【摘要】 目的 改进现有过继性人自然杀伤(NK)细胞体外诱导、分化及扩增方法,实现高效定向分化及大量扩增NK细胞的目的。方法 利用自剪切多肽P2A连接IL-15和4-1BBL基因,通过慢病毒感染和药物筛选的方法制备稳定表达IL-15和4-1BBL的K562滋养层细胞株。该方法可刺激人PBMC细胞向NK细胞分化及高效增殖。实验结果以x ± s表示并用两样本t检验进行比较。结果 经该方法培养的CD3- CD16+ 56+ NK细胞增殖倍数达到 (4480.43±37.80)倍;CD3- CD16+ 56+ NK细胞纯度达到94.79﹪;细胞内表达IFN-γ和TNF-α的NK细胞比例为 (63.07±3.37)﹪和 (54.85±2.04)﹪,分别高于对照组 (16.28±2.86)﹪和 (14.53±1.15)﹪(t = 62.25,22.66,P 均< 0.01);细胞分泌至培养上清液中的IFN-γ和TNF-α浓度为(111.39±6.95) pg/ ml和 (32.76±3.23) pg/ml,分别高于对照组 (44.99±4.74)pg/ml和 (11.09±2.45) pg/ml(t = 20.56,7.21,P 均< 0.01);在体外,该方法培养的NK细胞对K562细胞的杀伤效率为 (78.52±7.36)﹪,高于对照组 (48.53±6.66)﹪(t = 11.56,P < 0.01);对H520细胞的杀伤效率为 (65.03±3.27)﹪,高于对照组 (35.85±3.99)﹪(t = 11.35,P < 0.01)。结论 利用自剪切多肽P2A构建稳定高表达的IL-15和4-1BBL的K562滋养层细胞株,从而提高了NK细胞增殖倍数、纯度和细胞毒性。
  【关键词】 自剪切多肽P2A; 自然杀伤细胞; 滋养层细胞; 细胞免疫治疗
 
 
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