miR-363-3p靶向TWIST1调控上皮间质转化抑制非小细胞肺癌A549细胞迁移和侵袭

《中华细胞与干细胞杂志(电子版)》[ISSN:2095-1221/CN:11-9310/R] 期数: 2020年第10卷第3期 栏目: 论著

作者:李月华 曹爽

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页码:131

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【摘要】 目的 探讨miR-363-3p靶向TWIST1调控非小细胞肺癌A549细胞迁移和侵袭的分子机制。方法 将体外培养的A549细胞分为空白对照组(细胞未做任何处理);模拟物对照组(转染miR-363-3p模拟物阴性对照);模拟物组(转染miR-363-3p模拟物);后期实验另设:模拟物+ pcDNA组(转染miR-363-3p模拟物和pcDNA3.1空载体质粒);模拟物+ TWIST1组(转染miR- 363-3p模拟物和pcDNA3.1-TWIST1过表达质粒)。采用RT-PCR检测细胞中miR-363- 3p的表达,Western blot检测细胞中TWIST1蛋白和上皮间质转化 (EMT)相关蛋白Vimentin、E-cadherin的表达,Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭。双荧光素酶报告基因实验检测miR-363-3p和TWIST1的靶向关系。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果 与空白对照组和模拟物对照组比较,模拟物组A549细胞中miR-363-3p表达水平 (1.00±0.08、0.97±0.05比3.82±0.45)升高,TWIST1 mRNA (1.00±0.06、0.98±0.06比0.39±0.02)和蛋白的表达水平 (0.81±0.05、0.78±0.06比0.42±0.02)降低,差异具有统计学意义 (P均< 0.05)。与空白对照组和模拟物对照组比较,模拟物组A549细胞Vimentin 蛋白表达水平 (0.58±0.04、0.55±0.05比0.36±0.03)降低,E-cadherin蛋白的表达水平 (0.22±0.02、0.25±0.03比0.47±0.03)增高,迁移细胞数 (85.75±5.45、83.52±6.85比53.05±4.50)和侵袭细胞数 (128.26±6.15、125.95±8.05比71.64±5.75)降低,差异有统计学意义 (P均< 0.05)。与模拟物对照组比较,模拟物组细胞中Vimentin蛋白的表达水平 (0.55±0.05比0.36±0.03)降低,而E-cadherin蛋白表达水平 (0.25±0.03比0.47±0.03)升高,迁移细胞数 (83.52±6.85比53.05±4.50)和侵袭细胞数(125.95±8.05比71.64±5.75)均减少(P均< 0.05)。TWIST1是miR-363-3p潜在的靶基因。与模拟物+ pcDNA3.1组比较,模拟物+ TWIST1组A549细胞中Vimentin蛋白的表达水平(0.32±0.02比0.42±0.03)升高,而E-cadherin蛋白表达水平(0.56±0.04比0.38±0.03)降低,A549细胞的迁移数 (49.45±4.22比67.52±5.05)和侵袭数 (72.45±5.73比108.35±6.56)增加(P均< 0.05)。结论 miR-363-3p可通过靶向TWIST1调控EMT抑制A549细胞迁移和侵袭。
 

【关键词】 miR-363-3p; 非小细胞肺癌; EMT; 迁移; 侵袭; TWIST1