lncRNA RPL34-AS1通过靶向调控miR-575表达对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响

《中华细胞与干细胞杂志(电子版)》[ISSN:2095-1221/CN:11-9310/R] 期数: 2020年第10卷第3期 栏目: 论著

作者:张敬 董杰 王秋桔等

单位:

关键词:

页码:146

摘要:

【摘要】 目的 探究RPL34-AS1对卵巢癌细胞增殖、迁移的影响及其作用机制。方法 取对数生长期SKOV3细胞用无血清培养基同步化12 h,将pcDNA、pcDNA-RPL34-AS1、si-NC、si-RPL34-AS1、anti-miR-NC、anti-miR-575转染至SKOV3细胞中,分别记为pcDNA组、pcDNA-RPL34-AS1组、si-NC组、si-RPL34-AS1组、anti-miR-NC组、anti- miR-575组;将pcDNA-RPL34-AS1与miR-NC、miR-575分别共转染至SKOV3细胞中,记为pcDNA-RPL34-AS1+miR-NC组、pcDNA-RPL34-AS1+miR-575组。实时荧光定量PCR (RT- qPCR)检测临床组织标本及转染后各组细胞中RPL34-AS1和miR-575的表达水平;双荧光素酶报告实验检测RPL34-AS1和miR-575的靶向关系;四甲基偶氮唑盐比色法 (MTT)检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹 (Western blot)法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A (p21)、B细胞淋巴瘤/白血病-2 (Bcl- 2)、Bcl-2相关X蛋白 (Bax)蛋白表达水平。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果 与癌旁组织相比,卵巢癌组织中RPL34- AS1表达水平降低 (1.00±0.08比0.47±0.05),miR-575表达水平升高 (1.01±0.07比3.12±0.28)(P < 0.05)。转染si-RPL34-AS1后,细胞活性升高 (48 h:0.68±0.06比0.55±0.05;72 h:0.99±0.08比0.71±0.06),G1期细胞所占比例降低 (13.42±1.38比32.15±2.11),S期细胞所占比例升高(53.75±5.22比34.69±3.41),细胞凋亡率降低 (4.31±0.42比9.25±0.91),CyclinD1、Bcl-2表达水平升高 (0.92±0.08比0.71±0.07;0.86±0.07比0.61±0.06),p21、Bax表达水平降低(0.13±0.02比0.29±0.03;0.19±0.02比0.31±0.03) (P均 < 0.05)。RPL34-AS1靶向调控miR- 575,过表达RPL34-AS1或抑制miR-575后可抑制细胞活性,阻滞细胞周期和促进细胞凋亡。miR-575过表达逆转了RPL34-AS1过表达对卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制和凋亡促进的作用。结论 过表达RPL34-AS1可抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与下调miR-575有关。
 

【关键词】 RPL34-AS1; MiR-575; 卵巢癌; 增殖; 凋亡