HOXA-AS2靶向miR-17对人脐静脉内皮细胞生物学功能以及炎症因子的影响

《中华细胞与干细胞杂志(电子版)》[ISSN:2095-1221/CN:11-9310/R] 期数: 2020年第10卷第3期 栏目: 论著

作者:王磊 艾文 方叶青等

单位:

关键词:

页码:155

摘要:

【摘要】 目的 探讨HOXA-AS2对动脉粥样硬化 (AS)模型细胞生物学功能以及炎症因子的影响及分子机制。方法 本实验共分为4个实验;实验1:用100 μg/mL的ox-LDL处理EA.hy926细胞作为ox-LDL组,正常培养的细胞作为对照组;实验2:将pcDNA3.1、pcDNA3.1-HOXA-AS2转染至EA.hy926细胞中再用100 μg/mL的ox-LDL处理,记为ox-LDL+pcDNA3.1组、ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2组;实验3:将pcDNA3.1、pcDNA3.1-HOXA-AS2、si-NC、si-HOXA-AS2分别转染至EA.hy926细胞中,记为pcDNA3.1组、pcDNA3.1-HOXA-AS2组、si-NC组、si-HOXA-AS2组;实验4:将pcDNA3.1-HOXA-AS2与miR-NC、miR-17分别共转染至EA.hy926细胞中再用100 μg/mL的ox-LDL处理,记为ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2+miR-NC组、ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2+miR-17组。实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测HOXA-AS2和miR-17的表达水平;蛋白质印迹 (Western blot)法检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A (P21)、cleaved caspase 3蛋白表达;MTT检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA法检测白细胞介素-1 (IL-1)、白细胞介素-6 (IL-6)水平;荧光素酶报告实验检测HOXA-AS2和miR-17的靶向关系。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果 与对照组比较,ox-LDL组EA.hy926细胞中HOXA-AS2表达水平 (0.23±0.02比1.02±0.10),细胞增殖率[(47.83±5.01)﹪比 (100.06±10.20)﹪]均降低,细胞凋亡率[(26.81±2.47)﹪比(8.23±0.80)﹪]、P21 (0.82±0.08比0.20±0.02)、cleaved caspase 3 (0.67±0.06比0.14±0.01)、IL-1[(792.34±59.37)ng/L比 (326.14±34.59) ng/ L]和 IL-6表达水平[(53.67±4.65)ng/L比(19.25±2.11)ng/L]均升高,差异具有统计学意义 (P均 < 0.05)。与ox-LDL+pcDNA3.1组比较,ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2组EA.hy926细胞中HOXA-AS2表达水平 (0.87±0.09比0.22±0.02)、细胞增殖率[(89.94±8.34)﹪比 (48.21±4.86)﹪]均升高,细胞凋亡率[(12.33±1.18)﹪比(26.83±2.48)﹪]、P21 (0.33±0.03比0.81±0.08)、cleaved caspase 3 (0.24±0.02比0.69±0.06)、IL-1[ (446.25±46.84)ng/L比 (802.21±60.18)ng/L]和IL-6表达水平[(25.64±2.65)ng/L比 (55.21±5.10)ng/L]均降低,差异具有统计学意义 (P均 < 0.001)。与ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2+miR-NC组比较,ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2+miR-17组EA.hy926细胞中miR-17表达水平 (2.14±0.21比1.05±0.10)、细胞凋亡率[(23.31±2.33)﹪比(13.75±1.44)﹪]、IL-1水平[(684.26±62.38)ng/L比(451.21±43.58)ng/L]、IL-6水平[(41.29±4.37)ng/L比(26.11±2.39)ng/L]均升高,细胞增殖率[(53.67±5.46)﹪比(90.21±9.16)﹪]降低,差异具有统计学意义(P均 < 0.001)。HOXA-AS2与miR-17存在结合位点,荧光素酶报告实验显示,与miR-NC组比较,miR-17组中转染WT-HOXA-AS2的EA.hy926细胞荧光素酶活性降低 (0.33±0.03比1.01±0.10,P < 0.05),而转染MUT-HOXA-AS2的EA.hy926细胞荧光素酶活性差异无统计学意义(P > 0.05);与anti-miR-NC组比较,anti-miR-17组中转染WT-HOXA-AS2的EA.hy926细胞荧光素酶活性升高(2.29±0.21比1.00±0.10,P < 0.05),而转染MUT-HOXA-AS2的EA.hy926细胞荧光素酶活性差异无统计学意义(P > 0.05)。结论 过表达HOXA-AS2促进细胞增殖,抑制ox-LDL引起的细胞凋亡和炎症因子的释放,其机制可能与miR-17有关。
 

【关键词】 HOXA-AS2; miR-17; 动脉粥样硬化; 增殖; 凋亡; 炎症因子