LncRNA ZNF667-AS1靶向miR-31-5p对食管癌细胞增殖、迁移和凋亡的机制研究

《中华细胞与干细胞杂志(电子版)》[ISSN:2095-1221/CN:11-9310/R] 期数: 2021年第11卷第1期 栏目: 论著

作者:邱卫明 王建荣 徐志敏等

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关键词:

页码:8-15

摘要:

【摘要】 目的 探究长链非编码RNA (lncRNA)ZNF667-AS1通过靶向miR-31- 5p对食管癌细胞增殖和迁移的影响及潜在的机制。方法 采用实时荧光定量PCR (qPCR)技术检测ZNF667-AS1在食管癌细胞Eca109、EC1、TE1和正常食管上皮细胞Het- 1A的表达水平,并选择表达差异最大的细胞株进行后续实验。采用脂质体转染技术将pcDNA3.1- ZNF667-AS1过表达重组载体质粒转染至人食管癌Eca109细胞,实验分为对照组 (未行转染的Eca109细胞)、pcDNA3.1组 (转染空载体质粒的Eca109细胞)和ZNF667- AS1组 (转染pcDNA3.1- ZNF667- AS1质粒的Eca109细胞),qPCR技术检测pcDNA3.1- ZNF667-AS1的转染效果,噻唑蓝比色法 (MTT)和平板克隆实验检测过表达ZNF667-AS1对Eca109细胞增殖能力的影响,Transwell实验检测Eca109细胞迁移能力,流式细胞术检测Eca109细胞凋亡率,Western blot检测Eca109细胞中G1/S-特异性周期蛋白-D1 (Cyclin D1)、细胞周期依赖性激酶抑制因子 (p21)、上皮标志物上皮型钙黏蛋白 (E-cadherin)、间充质标志物神经型钙黏蛋白 (N-cadherin)、波形蛋白 (Vimentin)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关蛋白X (Bax)和B细胞淋巴瘤/白血病-2 (Bcl-2)的表达水平,生物信息学预测ZNF667- AS1与miR- 31-5p的互补配对关系,荧光素酶报告实验和qPCR技术验证ZNF667-AS1和miR-31-5p的靶向调控关系。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验。结果 与Het- 1A细胞相比,食管癌Eca109、EC1和TE1细胞中ZNF667-AS1的表达水平均降低 (1.00±0.08比0.29±0.04,0.36±0.05,0.33±0.06),差异有统计学意义 (P < 0.001)。与ZNF667-AS1组相比,对照组及pcDNA3.1组中ZNF667-AS1的表达水平 (3.14±0.32比1.00±0.10,0.94±0.09),细胞活力[ (63.42±3.75)﹪比100.00±4.85、(97.69±4.57)﹪],细胞克隆形成数 [(34.26±3.52)个比(95.64±10.22)个、(92.80±10.04)个],Cyclin D1表达水平 (0.26±0.05比0.75±0.08、0.71±0.07),迁移细胞数 [(20.24±2.35)个比(63.55±6.04) 个、(60.02±6.12) 个],细胞中E-cadherin表达水平 (0.19±0.02比0.48±0.05,0.49±0.05)和miR- 31-5p的表达水平 (0.30±0.03比1.00±0.10、0.95±0.09)均升高,p21表达水平 (0.79±0.09比0.24±0.05,0.26±0.06),细胞凋亡率[ (29.17±1.26)﹪比(3.41±0.73)﹪,(3.72±0.78)﹪],细胞中N-cadherin (0.87±0.09比0.42±0.04,0.40±0.04)、Vimentin表达水平 (0.82±0.08比0.44±0.04,0.44±0.04)均降低,差异有统计学意义 (P均< 0.001),与对照组比较,pcDNA3.1组ZNF667-AS1的表达水平,细胞活力,细胞克隆形成数,Cyclin D1和p21表达水平,迁移细胞数,细胞中E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和miR-31-5p表达水平,细胞凋亡率差异无统计学意义 (P均> 0.05)。生物信息学预测发现ZNF667-AS1和miR-31-5p存在靶向结合位点;荧光素酶报告实验结果显示,与空载转染组比较,miR-31-5p组ZNF667-AS1-Wt相对荧光素酶活性 (1.00±0.10比0.19±0.02)降低 (P < 0.05),ZNF667-AS1-Mut相对荧光素酶活性比较,差异无统计学意义 (P > 0.05)。结论 过表达ZNF667-AS1能抑制食管癌Eca109细胞的增殖、迁移并诱导其凋亡,其机制可能与ZNF667-AS1靶向调控miR-31-5p有关。
【关键词】 长链非编码RNA; miR-31-5p; 食管癌细胞; 增殖; 迁移; 凋亡